Thermo Scientific FastAP 热敏感性碱性磷酸酶可催化 DNA、RNA 和核苷酸释放 5'- 和 3'-磷酸基团。该酶还可去除蛋白中的磷酸基。
FastAP 是一种新型碱性磷酸酶，在所有 Thermo Scientific 限制性内切酶缓冲液和 PCR 缓冲液中均有活性。其可在 37°C 下于 10 分钟内对所有类型的 DNA 末端（平末端、5'-和 3'-突出端）进行去磷酸化。该酶在 75°C 下于 5 分钟内失活（参见支持性数据中的图 1）。因此，在连接前不需要去除碱性磷酸酶。
产品优势
• 重组酶
• 快速去磷酸化—37°C 下 10 分钟
• 快速、完全失活—75°C 下 5 分钟
• 载体 DNA 的同时酶切和去磷酸化
• 在限制性内切酶和 PCR 缓冲液中有 100% 活性
• PCR 纯化结合 Exo I
• 蛋白去磷酸化
一个方案适用于所有类型的 DNA 末端：
•5'-突出端
• 3'-突出端
• 平末端
• 单核苷酸
应用
• 克隆载体 DNA 的去磷酸化，以防止连接期间的重新环化
• 载体 DNA 的同时酶切和去磷酸化
• PCR 产物纯化：PCR 产物测序前的核苷酸降解
• T4 多聚核苷酸激酶标记前核酸 '-末端的去磷酸化5
• 必须进行 DNA 和 RNA 底物去磷酸化的其他应用
• 蛋白去磷酸化
注意
• FastAP 热敏感性碱性磷酸酶与 DNA 的结合可能导致琼脂糖凝胶中发生条带位移。为避免发生这种情况，可使用 6X DNA 上样染料 & SDS 溶液在 65°C 下孵育样品 10 分钟，在冰上冷却后进行电泳。
•FastAP 热敏感性碱性磷酸酶在所有限制性酶缓冲液中都有活性，可直接加入到酶切的 DNA 中。去磷酸化处理前无需热失活限制性酶。
